Xbridge Amide色谱柱的使用与方法开发(waters)

作者：张馨予

最最新糖类分析解决方案——Xbridge Amide色谱柱的使用与方法开发

糖分析的背景信息简介

*碳水化合物（糖）是自然界中丰度最高的一类有机化合物，他们在生理过程中有着非常重要的作用。多聚糖在我们的实际生活中无处不在，它可以被水分解成单糖，二糖，寡聚糖（3-10个单糖）和聚多糖（包含上千个单糖）等。

*碳水化合物由C/H/O组成，简写成C（H2O）最简单的碳水化合物是单糖，单糖由许多羟基链和一个醛基或者酮基组成。游离的醛或者酮基能将铜离子还原成亚铜离子，因此这样的糖被称为还原糖。

*当两个单糖被糖苷键连接便形成双糖。

*果糖、葡糖糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖是最常见的食用糖。

*通常来源于水果，蔬菜和蜂蜜。

糖的立体异构体

*单糖存在半缩醛货半缩醛的环状结构，在水溶液中开链和环状结构平衡存在

*糖的差异如果仅仅是单个碳原子的立体化学，被称为“立体异构”它是很难通过色谱进行分离的。

目前LC技术分析碳水化合物所面临的问题

*通常使用氨基柱或多氨基柱

*通常使用示差检测器-主要是由于碳水化合物的紫外吸收弱

*通常遇到的问题（1，盐干扰2，端机异构体的变旋3，某些糖和色谱填料形成的SCHIFF 碱,4，高温条件下会造成还原型糖的损失5，色谱柱流失，不能兼容MS/ELSD检测器6，色谱柱寿命短,7，不能用于梯度方法）

如图一做有不同氨基柱五种糖类分析的时候，当盐分的化合物对实验有很大的影响，打*的部分可以看到第一支色谱柱5号峰分析时基线会太高且有拖尾第二支色谱柱中使的1号峰前沿在第三支色谱柱对于1号峰影响尤为严重。

如图二α 、β葡萄糖变旋异构时会出现2个峰值，同样是葡萄糖出出现分叉这样的话进行化合物分析定量会产生影响

BEH Amide系列色谱柱

色谱柱配基类型粒径配基密度碳含量封尾类型建议PH

BEH Amide三键键合酰胺1.7,3.5um7.5umol/m212%None2-11

1，如图三用BEH Amide做分析的时，这些盐份不会影响到糖的分离，我们把盐的浓度从5mol调到10mol甚至40mol时都不会对分离产生影响。

2，氨基键合的色谱柱会形成schiff碱，而BEH Amide键合的是酰胺基不会形成schiff碱。

3，如图四第一支是采用通常的方式，在75%的乙腈条件下去分离端基异构或者变旋异构的化合物的时候，会有峰值出来，在第二支加入0.2%TEA的时候可以看到分叉的峰渐渐合并起来在第三支将同时柱温调到90℃ 4号麦芽糖和5号乳糖都会迅速稳定下来的变旋异构会形成一个峰

4，如图五绿色是常规氨基柱，蓝色为BEH Amide红色为聚胺基polyamine加入了0.1% TEA 对于酰胺基柱的柱流失是非常小的，可以让我们更好的对检测器的选择。

5，如图六在碱性条件下高温的时候，流动相是丙酮，在不同的样品基质当中，对保留和RSD都会有很高的结果。

6，对目标化合物有个很好的设定时对各批次间做分析时会出现良好的

BEH Amide固定相优势

*化学稳定性-传统氨基柱流失严重，稳定性低

*Schiff碱或烯胺的形成令待检测物浓度减低-氨基柱或聚氨基柱会形成schiff碱或烯胺

*选择性-与BEH HILIC及硅胶HILIC比，具有不同的选择性

*保留能力-与BEH HILIC比提高了保留能力

*应用案例：牛奶，水果，面包，酒，薯片，动物饲料，药用辅料如止咳糖浆等

样品制备

常用BEH Amide系列常用规格和价格（其他规格，具体折扣和货期请咨询客服人员）

色谱柱长度内径膜度部件号市场价格

BEH Amide

50mm2.1mm1.7um 186004800 8601.84元

150mm2.1mm1.7um1860048029486.36元

100mm3mm1.7um1860048058936.46元

(北京色谱信息网有该系列 BEH Amide色谱柱的所有规格，具体折扣和货期请联系在线客服人员或者致电18612174297 吴春兰谢谢您的支持！)

如何开发适合实验室的糖类分析的开发？

样品的制备

*非常简单的制备

*液体样本（酒类的葡萄酒，烈酒的白酒等）

-稀释：50:50ACH/H2O –-过滤，使用0.45um&0.22um PVDF（适合有机相和水相）滤膜（如果需要）

*提取固态样本-称取样品到（-3g）到50ml离心管

—加入25ml， 50:50ACH/H2O并混匀（均质）---离心，3200rpm,30分钟----收集上清液，过0.45um&0.22umPVDF滤膜

*根据样品及检测器的需要进行稀释

*对于基质非常复杂或者待分析物浓度很低的样品，需要使用如SPE等富集策略进行处理

*建议使用VanGuard保护柱以延长色谱柱寿命

*当分析还原糖（如果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖、乳糖、甘油醛等）请按照以下建议操作，否则会产生分叉峰